Nuclear Gene HS Takara PCR Optimization
Mix A : HS Takara RXN Mixture
|
conc
|
1X
|
6.5
|
'
|
Milli Q water |
|
2.1 |
13.65 |
|
Takara HS Buffer |
10X |
2 |
13 |
|
dNTP |
2.5uM |
0.8 |
5.2 |
|
Primer Mix |
20uM |
4 |
|
|
HS Taq |
5U |
0.1 |
0.65 |
|
Template |
1ng / 20ng |
1 |
6.5 |
|
|
|
|
39 |
8.0ul / RXN
|
|
|
|
|
|
Mix B : HS Takara RXN Mixture |
conc |
1X |
6.5 |
|
Milli Q water |
|
5.1 |
33.15 |
|
Takara HS Buffer |
10X |
2 |
13 |
|
dNTP |
2.5uM |
0.8 |
5.2 |
|
Primer Mix |
5uM |
1 |
|
|
HS Taq |
5U |
0.1 |
0.65 |
|
Template |
1ng |
1 |
6.5 |
|
|
|
|
58.5 |
7.0ul / RXN
|
A PCR cycle |
|
|
|
|
95C |
3 min |
|
|
|
95C |
5 sec |
|
|
|
60C |
1 min |
|
|
|
x35 |
|
|
|
|
Sample 1-18 on Machine 1 / Sample 19-36 on Machine 2
AMP Lane
|
Template
|
Mix A : New 20uM Primer
|
AMP Lane
|
Template
|
Mix A :New 20uM Primer
|
1 |
AV 1ng |
A1 |
19 |
AV 1ng |
A1
|
2 |
AV 1ng |
A2 |
20 |
AV 1ng |
A2
|
3 |
AV 1ng |
A3 |
21 |
AV 1ng |
A3
|
4 |
AV 1ng |
A4 |
22 |
AV 1ng |
A4
|
5 |
AV 1ng |
A5 |
23 |
AV 1ng |
A5
|
6 |
AV 1ng |
A6 |
24 |
AV 1ng |
A6
|
7 |
AV 20ng |
A1 |
25 |
AV 20ng |
A1
|
8 |
AV 20ng |
A2 |
26 |
AV 20ng |
A2
|
9 |
AV 20ng |
A3 |
27 |
AV 20ng |
A3
|
10 |
AV 20ng |
A4 |
28 |
AV 20ng |
A4
|
11 |
AV 20ng |
A5 |
29 |
AV 20ng |
A5
|
12 |
AV 20ng |
A6 |
30 |
AV 20ng |
A6
|
|
|
Mix B : Old 5uM Primer |
|
|
Mix B : Old 5uM Primer
|
13 |
AV 1ng |
A1 |
31 |
AV 1ng |
A1
|
14 |
AV 1ng |
A2 |
32 |
AV 1ng |
A2
|
15 |
AV 1ng |
A3 |
33 |
AV 1ng |
A3
|
16 |
AV 1ng |
A4 |
34 |
AV 1ng |
A4
|
17 |
AV 1ng |
A5 |
35 |
AV 1ng |
A5
|
18 |
AV 1ng |
A6 |
36 |
AV 1ng |
A6
|
Load 2.0ul Sample
HS Takara RXN Mixture
|
conc
|
1X
|
6.5
|
'
|
Milli Q water |
|
3.1 |
20.15 |
|
Takara HS Buffer |
10X |
2 |
13 |
|
dNTP |
2.5uM |
0.8 |
5.2 |
|
Primer Mix |
20uM |
2 |
|
|
HS Taq |
5U |
0.1 |
0.65 |
|
Template |
Instagene / 1ng |
2 |
13 |
|
|
|
|
52 |
8.0ul / RXN
|
A PCR cycle |
|
|
|
|
95C |
3 min |
|
|
|
95C |
5 sec |
|
|
|
60C |
1 min |
|
|
|
x35 |
|
|
|
|
AMP Lane
|
Template
|
2.0ul Primer
|
1 |
71 Instagene |
A1
|
2 |
71 Instagene |
A2
|
3 |
71 Instagene |
A3
|
4 |
71 Instagene |
A4
|
5 |
71 Instagene |
A5
|
6 |
71 Instagene |
A6
|
7 |
72 Instagene |
A1
|
8 |
72 Instagene |
A2
|
9 |
72 Instagene |
A3
|
10 |
72 Instagene |
A4
|
11 |
72 Instagene |
A5
|
12 |
72 Instagene |
A6
|
13 |
AV 1ng |
A1
|
14 |
AV 1ng |
A2
|
15 |
AV 1ng |
A3
|
16 |
AV 1ng |
A4
|
17 |
AV 1ng |
A5
|
18 |
AV 1ng |
A6
|
Load 2.0ul Sample
|