UA Biophysics:Protocols:Elution Buffer

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Buffer HEPES: 2 L a 400 mOsM pH 7.4

Materiales

  • HEPES 9.532 g
  • NaCl 19.869 g
  • NaOH 1 M 30 ml
  • HCl 1 M

Procedimiento

  1. Colocar 1.6 litros de agua deionizada en la botella con un agitador.
  2. Diluir el HEPES (concentracion final de 20 mM) y el NaCl (concnetracion final de 170 mM).
  3. Ajustar pH a 7.4 usando NaOH y/o HCl.
  4. Determinar la concentración de HCl y NaOH. Por ejemplo, si entre los dos se agregaron 16 ml a 1M, entonces para un buffer de 2 L la concentración es de 8 mM.
  5. Calcular la osmolaridad y completar los 400 mOsm con NaCl.
  6. Sacar el agitador y completar los dos litros con agua deionizada
Ejemplo
Material MW (g/mol) [] mM mOsM Cantidad
HEPES 238.30 20 20 9.532 g
NaCl 58.44 170 340 19.869 g
NaOH -- 8 8 16 ml
NaCl 58.44 16 32 1.870 g



Elution Buffer_ESP

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