UA Biophysics:Protocols:Calcein ESP

Calceina: 400 mOsM, 50 mM, 100 ml, pH 7.4

Materiales:

• Probeta 100 ml
• 30 ml de NaOH (1M)
• HCl (1M)
• 3,113 g de calceina
• 40 ml Buffer H:
  • 5 ml de EDTA 0.2 mM (Para que quede a 0.01 mM en la solución final)
  • HEPES 238.3 mg (para que quede a 10 mM en la solución final).

Procedimiento:

1. En la probeta medir 20 ml de NaOH 1M y colocar agitador
2. Disolver en el NaOH 3,113 g de calceina
3. Agregar los 40 ml del Buffer H a la calceina
4. Ajustar pH con NaOH y/o HCl 1M teniendo cuidado de medir el volumen agregado.
5. Determinar la concentración de HCl y NaOH. Por ejemplo, si entre los dos se agregaron 23 ml a 1M, entonces para un buffer de 100 ml la concentración es de 230 mM.
6. Con el cálculo osmolaridad se determina la cantidad de NaCl para agregar.
7. Sacar el agitador y completar los 100 ml

Ejemplo

Material	MW (g/mol)	[] mM	mOsM	Cantidad
Calceina	622.55	50	50	3.113 g
Buffer H	--	10	10	40 ml
NaOH + HCl	--	230	230	23 ml
NaCl	58.44	55	110	321.4 mg

Nota: almacenar a 4°C en frasco ambar

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