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Etchevers:Extraction ARN francais: Difference between revisions
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Etchevers:Extraction ARN francais (view source)
Revision as of 08:14, 14 December 2006
, 14 December 2006→Technique
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7- Ajouter X ml (vol/vol) d’éthanol à 70% au lysat homogénéisé et bien mélanger en secouant vigoureusement. (NE PAS CENTRIFUGER!!!). | 7- Ajouter X ml (vol/vol) d’éthanol à 70% au lysat homogénéisé et bien mélanger en secouant vigoureusement. (NE PAS CENTRIFUGER!!!). | ||
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Etape 2 : Purification des ARN sur colonne RNeasy | Etape 2 : Purification des ARN sur colonne RNeasy | ||
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10- Eliminer l’éluat, les ARN sont sur la colonne. | 10- Eliminer l’éluat, les ARN sont sur la colonne. | ||
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Etape 3 : Digestion à la DNase | Etape 3 : Digestion à la DNase | ||
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17- Eliminer l’éluat. | 17- Eliminer l’éluat. | ||
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Etape 4 : Lavages | Etape 4 : Lavages | ||
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22- Centrifuger 2 min à vitesse maximum pour sécher le gel/membrane de la colonne. Vider le tube à collection, re-centrifuger 1 minute. | 22- Centrifuger 2 min à vitesse maximum pour sécher le gel/membrane de la colonne. Vider le tube à collection, re-centrifuger 1 minute. | ||
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Etape 5 : Elution | Etape 5 : Elution | ||
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25- Répéter l’élution de l’étape 26 avec une 2e volume de 30 µl d’eau RNase free, mais sans attendre. Cette 2e élution ne devrait plus avoir beaucoup d'ARN, sauf si la colonne est surchargée, en lequel cas on récupere beaucoup. | 25- Répéter l’élution de l’étape 26 avec une 2e volume de 30 µl d’eau RNase free, mais sans attendre. Cette 2e élution ne devrait plus avoir beaucoup d'ARN, sauf si la colonne est surchargée, en lequel cas on récupere beaucoup. | ||
==Notes== | ==Notes== | ||
