Introsynbio:Modulo 1

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Introducción a la Biología Sintética '

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Modulo 1: Principios de Ingeniería Genetica

Introducción

En este modulo aprenderas las técnicas basicas utilizadas en ingeniería genética.

Objetivos

Para esta sección se harán dos experimentos con lo que se espera que se aprendan habilidades importantes y esenciales para un laboratorio de biología molecular. Como objetivos especificos se espera que el alumno aprenda a:

*Crear celulas competentes
*Transformar Mediante el Método de Heatshock
*Extraer plasmidos 
*Hacer digestión de plasmidos con enzimas de restricción
*Correr geles de electroforesis 
*Hacer uso de ligasa para unir distintas piezas geneticas

Resumen

Experimento 1. Expresión de la Proteina Roja Fluorescente

El propósito de este experimento es transformar el Plásmido que codifica para la proteína roja fluorescente en Escherichia coli. Este plásmido contiene los genes necesarios para producir el fluoróforo rojo, así como genes de resistencia a antibiótico, en este caso cloranfenicol. Posteriormente estas bacterias que contienen el plásmido deben ser cultivadas en platos con medio de cultivo y cloranfenicol. Al crecer en medios de cultivo con antibiótico se genera un proceso de selección, cuyo objetivo es eliminar todas las bacterias que no hayan incorporado el "generador de RFP". La velocidad de expresión del fluoróforo rojo está controlada por un promotor constitutivo, por lo que la proteína fluorescente roja se expresa continuamente y no requiere de un inductor. Después de aproximadamente un día de incubación, los estudiantes pueden notar un cambio en el color de las bacterias de ocre a rojo a simple vista.

Experimento 2.Bioarte
Experimento 3. Ensamblado y caracterización de GFP y mCherry bajo el control de un promotor inducible

Se le dará un cultivo de E. coli que alberga un plásmido con uno de los casetes de genes generadores de color. Tomaremos el casete de este plásmido y lo pondremos bajo el control de un promotor inducible. Luego, caracterizaremos el comportamiento de estas nuevas piezas compuestas. Para hacer esto, cultivaremos los cultivos en el rango de concentraciones de inductor. A través de este ejercicio practicaremos las habilidades importantes de laboratorio que usará en los módulos posteriores.