Biomod/2014/UANL/Katia/ensayos preliminares/uricasa

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 <title></title>

</head> <body> <p class="MsoNormal"><span lang="ES-TRAD"><span

style="font-weight: bold;">Uricasa</span><o:p></o:p></span></p>

<p class="MsoNormal"><span style="">Metodo: Espectrofotometria A<sub>290</sub>. Oxidación de A. úrico a Alantoina.<o:p></o:p><br> Condiciones: pH 8.5, 25C.<br> <br> Reactivos:<br> - Buffer Borato de sodio 0.1M pH8.5<o:p></o:p><br> - s´ln A. úrico 0.12 M<br> <i style="">* s´ln A. úrico: </i></span><i

style=""><span lang="ES-TRAD">Disolver

carbonato de litio en 15mL de agua y filtrar. Preparar solucion fresca disolviendo 100 mg de acido urico en filtrado. Calentar a 50º - 60º C puede ser necesario</span></i><i

style=""><span style=""><o:p></o:p><br>
  • </span><span lang="ES-TRAD"> Antes de usarse 0.1

M de borato de sodio y 0.12 mM de acido urico deben ser oxigenados burbujeando O2 por las soluciones 10-15 minutos. Reoxigenar cada 20 min.<o:p></o:p></span></i></p> <p class="MsoNormal"><span lang="ES-TRAD">Enzima<br> Disolver a un mg/ml en buffer de borato de sodio frio (5º C) 0.1 M pH 8.5<o:p></o:p><br> Inmediatamente duliur a concentracion 0.01-0.1 unidades/mL<o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span lang="ES-TRAD"><o:p>&nbsp;</o:p><br> Procedimiento <o:p></o:p><br> Ajustar el espectrofotometro a 290nm a 25º C<o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span lang="ES-TRAD"><o:p><br> </o:p>CUBETA:<o:p></o:p><br> Buffer Borato 0.5 mL<o:p></o:p><br> 0.12 mM Acido Urico 2.0 mL<o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span lang="ES-TRAD"><o:p>&nbsp;</o:p>Incubar en espectrofotometro por 4-5 minutos para alcanzar temperatura de equilibrio y establecer el rango de blanco. En tiempo cero agregar 0.5 mL de enzima y anotar la disminucion de A290 por 6-7 minutos.</span></p> <p class="MsoNormal"></p> <p class="MsoNormal">REFERENCIA: http://www.worthington-biochem.com/up/assay.html<span lang="ES-TRAD"><o:p></o:p></span></p> </body> </html>