Biomod/2014/UANL/Katia/ensayos preliminares/catalasa
<html> <head> </head> <body> <p class="MsoNoSpacing"><span lang="ES-TRAD"><span
style="font-weight: bold;">Catalasa .</span><o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span lang="ES-TRAD">Metodo: Espectrofotometria A<sub>240</sub>. Reducción del Peroxido de Hidrogeno <o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNoSpacing"><span lang="ES-TRAD">Condiciones: pH7, 25C.<br style=""> <!--[if !supportLineBreakNewLine]--><br style=""> <!--[endif]--><o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span lang="ES-TRAD">Reactivos.<br> - Buffer fosfato de potasio dibásico thihidratado 50mM <br> <i style="">*utilizar HCl para ajustar.</i><br> - S´ln de Peroxido de hidrogeno 0.036%<br> <i style="">** Preparar buffer fostato usando peroxido de hidrogeno (30% (p/p)</i><br> -Catalasa 10U por corrida<br> <i style=""><br>
- BLANCO.-. El A<sub>240</sub> debe estar entre 0.550 y
0.520 unidades de absorbancia. Si es necesario agregar peroxido de hidrogeno para incrementar la absorbancia de el buffer fosfato para disminuir la absorbancia.</i><o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span lang="ES-TRAD"><o:p> </o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span lang="ES-TRAD">Procedimiento<o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span lang="ES-TRAD">En una mezcla de reaccion de 3.00 mL, las concentraciones finales son 50mM de Fosfato de Potasio, 0.036% (p/p) Peroxido de hidrogeno y 10 unidades de catalasa.<o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><b style=""><span
lang="ES-TRAD">1.</span></b><span lang="ES-TRAD"> Usando un espectrofotometro con termostato,
hacer blanco en contra de una cubeta conteniendo Buffer Fosfato.<o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><b style=""><span
lang="ES-TRAD">2.</span></b><span lang="ES-TRAD"> Pipetear 2.90 mL de solucion de peroxido de
hidrogeno en una cubeta<o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span lang="ES-TRAD"><br> <b style="">NOTA:</b> Cada cubeta se tendra que correr una a la vez, asi que no preparar la siguiente cubeta de prueba hasta que se termine de correr la cubeta anterior.<o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span lang="ES-TRAD"><o:p> </o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><b style=""><span
lang="ES-TRAD">3.</span></b><span lang="ES-TRAD"> Por cada cubeta, monitorear el A<sub>240</sub>
hasta que sea constante, y luego agregar 0.10 mL de solucion de catalasa.<br> <b style="">4.</b> Inmediatamente mezclar bien por inversion. Anotar el tiempo requerido para que la A<sub>240</sub> disminuya de 0.45 a .40 unidades de absorbancia.<br style=""> <!--[if !supportLineBreakNewLine]--><br style=""> <!--[endif]--><o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span lang="ES-TRAD">Tomar una lectura por segundo por aprox. 180 segundos.</span></p> <p class="MsoNormal"></p> <p class="MsoNormal"><span
style="font-size: 11pt; line-height: 115%; font-family: "Calibri","sans-serif";"><a href="http://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/protocols/biology/enzymatic-assay-of-catalase.html">REFERENCIA:
http://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/protocols/biology/enzymatic-assay-of-catalase.html</a></span><span
lang="ES-TRAD"><o:p></o:p></span></p>
</body> </html>
