Biomod/2014/UANL/Katia/ensayos preliminares/catalasa

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Catalasa .<o:p></o:p>

Metodo: Espectrofotometria A240. Reducción del Peroxido de Hidrogeno <o:p></o:p>

Condiciones: pH7, 25C.

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Reactivos.
- Buffer fosfato de potasio dibásico thihidratado 50mM
*utilizar HCl para ajustar.
- S´ln de Peroxido de hidrogeno 0.036%
** Preparar buffer fostato usando peroxido de hidrogeno (30% (p/p)
-Catalasa 10U por corrida

  • BLANCO.-. El A240 debe estar entre 0.550 y

0.520 unidades de absorbancia. Si es necesario agregar peroxido de hidrogeno para incrementar la absorbancia de el buffer fosfato para disminuir la absorbancia.<o:p></o:p>

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Procedimiento<o:p></o:p>

En una mezcla de reaccion de 3.00 mL, las concentraciones finales son 50mM de Fosfato de Potasio, 0.036% (p/p) Peroxido de hidrogeno y 10 unidades de catalasa.<o:p></o:p>

1. Usando un espectrofotometro con termostato, hacer blanco en contra de una cubeta conteniendo Buffer Fosfato.<o:p></o:p>

2. Pipetear 2.90 mL de solucion de peroxido de hidrogeno en una cubeta<o:p></o:p>


NOTA: Cada cubeta se tendra que correr una a la vez, asi que no preparar la siguiente cubeta de prueba hasta que se termine de correr la cubeta anterior.<o:p></o:p>

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3. Por cada cubeta, monitorear el A240 hasta que sea constante, y luego agregar 0.10 mL de solucion de catalasa.
4. Inmediatamente mezclar bien por inversion. Anotar el tiempo requerido para que la A240 disminuya de 0.45 a .40 unidades de absorbancia.

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Tomar una lectura por segundo por aprox. 180 segundos.

<a href="http://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/protocols/biology/enzymatic-assay-of-catalase.html">REFERENCIA: http://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/protocols/biology/enzymatic-assay-of-catalase.html</a><o:p></o:p>

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