User:Margarida Azevedo/Notebook/Margarida Azevedo/2010/04/20

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  • Proponha com detalhe adequado um procedimento experimental que permita a identificação das mutações presentes no gene da beta-globina na família do nosso caso de estudo.
O procedimento experimental adequado seria o PCR. 
Material/Reagentes: - Mix: H2O, solução tampão,dNTP's, primers, DNA polimerase
                    - 10 x solução tampão (contém MgCl2)
                    - mix de dNTPs
                    - Foward and reverse Primer
                    - DNA
                    - DNA polimerase
                    - H2O
                    
Síntese do primer à mão: - O primer deve ter um comprimento de 15 a 30 nucleótidos. Identificamos a no gene as duas mutações da Maria e escolhemos 20 nucleótidos a 5' e 20 nucleótidos a 3' para a síntese dos primers. A 5' o primer (primer reverso) terá a mesma sequência de nucleótidos que a cadeia 3' - 5'. A 3', o primer será complementar à cadeia 3' - 5'. Temos ainda que desenhar primers internos, que cubram a região central da sequência. 
Síntese do primer utiçizando ferramentas informáticas:  podemos usar NCBI 
Procedimento experimental: 


Proponha com detalhe adequado um procedimento experimental que permita o estudo da expressão do gene da beta-globina na família do nosso caso de estudo.