User:Diogo Amaral/Notebook/Caderno BioMol/2010/05/11

From OpenWetWare
Jump to: navigation, search
Owwnotebook icon.png Project name Report.pngMain project page
Resultset previous.pngPrevious entry      

TP8

  • Considerando que o organismo humano adulto tem 1013 células e que 1 ml de cultura de bactérias tem 5x109 células/ml, compare o número de cópias de um gene que pode extrair de uma pessoa e do plasmídeo presente num litro de cultura de bactérias.

Humano: 2*10^13=20^13 Plasmideo(1ml=10^3L): 1000*700*5*10^9=35*10^14

  • Acabou de obter o DNA codificante para uma proteína humana e pretende produzir essa proteína em bactérias. Qual dos vectores escolheria para efectuar a clonagem? Justifique.

Escolheria o vector B, pois para haver a expressao do gene é necessario um promotor e o A não possui promotor.

  • Qual dos fragmentos codificantes para a proteína humana escolheria para inserir no vector? Justifique.

Escolheria o Bam HI - Eco RI pois assim pode ligar-se com a zona de policlonagem que tem uma extremidade Bam HI no inicio.

  • Diga como faria esta clonagem. Consegue assegurar que o fragmento seja introduzido na posição correcta para a expressão da proteína?

Usava a Bam HI já que corta nas extremidades do segmento e permite a inserçao no inicio do local de policlonagem, mas como ambas as extremidades do fragmento sao cortaveis com a Bam HI, este podia ser inserida na posiçao inversa e nao permitir a expressao da proteina.

  • Como procederia para resolver o problema?

Podia fazer uma selecçao das bacterias que expressassem a proteina, mas para resolver mesmo teria que encontrar otro sitio de corte no plasmideo e no vecotr.

  • A sua clonagem funcionou ou não?

Sim, pois os 2 cortes na lane 3 indicam que o fragmento esta inserido no plasmideo, embora nao indique se esta bem posicionado ou inversamente ao desejado.