User:Gaston Paris/Notebook/Cloando FliM/2008/07/29

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PCR para clonar FliM

Calles 1, 2 y 3
Calles 1, 2 y 3
Reactivos 1 2 3
DNA B. abortus 100ng/μL 1μL 1μL -
DNA B. melitensis - - 3μL
Brucella_FliM_ATG 10μM 5μL 5μL 5μL
Babo_Stop_Bam 10μM 5μL 5μL -
Bmel_Stop_Bam 10μM - - 5μL
dNTPs 2mM 5μL 5μL 5μL
Buffer pfu 10X 7,5μL 7,5μL 7,5μL
pfu IIB 1μL 1μL 1μL
H2O 25μL 25μL 23μL

Los ciclos fueron

  • 94°C 5 min
  • 35 ciclos de
    • 94°C 30seg
    • 55°C 30seg
    • 68°C 2min
  • 68°C 10 min

Repetición de PCR

Reactivos S1 S1.2 S1.5 S2 L1 L1.2 L1.5 L2
DNA B. abortus 100ng/μL 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL
Brucella_FliM_ATG 10μM 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL
Babo_Stop_Bam 10μM 5μL 5μL 5μL 5μL - - - -
Bmel_Stop_Bam 10μM - - - - 5μL 5μL 5μL 5μL
dNTPs 2mM 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL
Buffer pfu 10X 5μL 6μL 7,5μL 10μL 5μL 6μL 7,5μL 10μL
pfu IIB 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL
H2O 28μL 27μL 25.5μL 23μL 28μL 27μL 25.5μL 23μL
MWM, PCR recombinates 1,2 y 3, S1, S1.2, S1.5, S2, L1, L1.2, L1.5 y L2
MWM, PCR recombinates 1,2 y 3, S1, S1.2, S1.5, S2, L1, L1.2, L1.5 y L2

Los ciclos fueron

  • 94°C 5 min
  • 35 ciclos de
    • 94°C 30seg
    • 55°C 30seg
    • 68°C 2min
  • 68°C 10 min

Se bajo el ramping time a 1.5°C/seg

La PCR dió resultados positivos, en todas las concentraciones utilizadas


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