UA Biophysics:Protocols: GUV

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Las LUVs preparadas se depositan en los electrodos de platino con ayuda de una micropipetada en gotas que no excedan de 2 μl. En total se agrega 50 gotas por cada para de electrodos. Se seca la solución liofilizando la muestra durante 3 horas. Se llena las celdas con 1 ml de sucrosa cada una a una concentración de 200mM. El proceso de electroformación posee tres etapas en las cuales se contrala un campo electromagnético oscilante:

*Se aplica una diferencia de potencial de 0.25 Vpp a una frecuencia de 10Hz durante 5 min. Luego se aumenta la diferencia de potencial entre los electrodos en 0.25 Vpp cada 5 min hasta alcanzar un voltaje máximo de 3.5Vpp manteniendo la frecuencia constante. En esta etapa es importante que el incremento se haga paulatinamente de tal manera que el tamaño de las vesículas vaya aumentando. 
*En esta etapa se controla el tamaño de las vesículas, por lo cual se aplica una diferencia de potencial de $3.5Vpp$ a una frecuencia de 10 Hz durante una hora. 
*Se disminuye la frecuencia cada 5 min en un valor de 0.5Hz hasta alcanzar una frecuencia de 4Hz, mateniendo el voltaje constante a 3.5 Vpp. En etapa es fundamental que la frecuencia disminuya gradualmente ya que en este paso las vesículas se cierran y se desprenden de los electrodos.

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