Others 10. 박재형(JaeHyung Park): Difference between revisions
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*특수문자들<br> | |||
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가장 앞에 있는 기호가 이미지 파일에 사용되는 구분용 특수 문자 입니다. | |||
=Paper Study= | |||
==2. 24 (Tue)== | |||
===Self-assembled DNA nanostructures for distance-dependent multivalent ligand–protein binding=== | |||
http://www.nature.com/nnano/journal/v3/n7/abs/nnano.2008.164.html#close <br> | |||
[http://www.nature.com/nnano/journal/v3/n7/abs/nnano.2008.164.html link title] | |||
*Aptamer | |||
Aptamers are oligonucleotide or peptide molecules that bind to a specific target molecule. | |||
*Aptamer의 거리,helix 수에 따른 결합 효율 | |||
#aptamer 거리가 5.3nm일 때 최적 | |||
#four-helix bundle(4HB)가 5HB보다 결합이 높음 | |||
*Aptamer의 종류에 따른 효율 | |||
#서로다른 Aptamer일 때가 동일한 aptamer일 때보다 효율이 높음 | |||
[[Image:150224pjh-aptamer.PNG]] | |||
*Aptamer의 거리를 통한 실험결과 | |||
:Aptamer의 거리가 5.8nm,20.7nm 인 두가지로 실험을 진행했을 때 5.8nm인 부분에 Thrombin이 결합 | |||
::※즉 선택적인 결합이 가능 | |||
[[Image:150224pjh-aptamer2.PNG]] | |||
=Paper Study= | |||
==2. 17 (Tue)== | |||
===Single-molecule chemical reactions on DNA origami=== | |||
http://www.nature.com/nnano/journal/v5/n3/full/nnano.2010.5.html#close <br> | |||
[http://www.nature.com/nnano/journal/v5/n3/full/nnano.2010.5.html link title] | |||
*Linker A,B,C | |||
#non-cleavable linker type A | |||
#linker type B, which contains a disulphide moiety that can be cleaved by reduction | |||
# Linker C can be cleaved by singlet oxygen generated with light in the presence of a singlet oxygen photosensitizer (PS) | |||
[[Image:150217pjh-linker.PNG]] | |||
*three functional groups | |||
#The reaction of biotin-linked azide Az took place in the presence of the in situ generated copper(I)-THTA (tris-(1-[3-hydroxypropyl]triazolyl-4-methyl)amine) catalyst | |||
#The reaction of the biotin NHS-ester Es was performed in a slightly alkaline buffer/DMF mixture | |||
#The reaction of the biotin-linked alkyne Al was studied in the presence of the in situ generated copper(I)-THTA in a DMF/buffer mixture | |||
[[Image:150217pjh-functional group.PNG]] | |||
*The three reactions can proceed successively on the immobilized DNA origami template with high selectivity. | |||
=Team presentation= | |||
==2. 12 (Thu)== | |||
===Nucleic acid enzymes=== | |||
Box file name : 150212_Team3-nucleic acid enzymes.pptx<br> | |||
* '''PCR''' | |||
:DNA,RNA의 특정영역을 대량으로 증폭하는 기술. | |||
::-Primer가 taq polymerase에 의해 신장됨. | |||
:Denaturation - Annealing - Elongation 의 과정을 반복하여 수행. | |||
::-이론적으로 n사이클 시행 시 2^n개의 ds DNA 생성. | |||
:mRNA를 cDNA로 역전사하는 reverse transcriptase를 이용하는 RT-PCR도 있음. | |||
[[Image:150212pjh pcr.png]] | |||
* '''Restriction Enzyme''' | |||
:ds DNA의 특정 염기서열을 인식하여 그 부분이나 그 주변을 절단하는 효소. | |||
:바이러스 등 외부에서 온 DNA를 절단하여 배제시키는 자기방어 기능도 가짐. | |||
:Restriction Enzyme에 의해 절단되는 모양에 따라 Blunt end,Sticky end로 나뉨 | |||
[[Image:150212pjh restriction enzyme.png]] | |||
* '''Ligation''' | |||
:DNA나 RNA의 끝을 이어주는 과정 | |||
:Restriction Enzyme과 함께 쓰이는 경우가 많음. | |||
:Ligase에 의해 phosphodiester bond로 DNA 분자 내에서 일어나는 한가닥 파손(불연속)을 복구. | |||
[[Image:150212pjh ligation.png]] | |||
* '''Gene Cloning''' | |||
#PCR을 통해 foreign DNA을 생성하고 | |||
#같은 Restriction Enzyme으로 vector와 foreign DNA을 절단한 뒤 | |||
#foreign DNA을 vector에 삽입하여 Ligation시켜 결합함. | |||
#만들어진 recombinant DNA를 bacteria 내부로 trasformation 시키면 | |||
#cell 내에서 증식이 일어나고 셀 자체도 많은 colony를 이루게 됨. | |||
[[Image:150212pjh gene cloning.jpg]] | |||
=Paper Study= | |||
==2. 10 (Tue)== | |||
===Molecularly self-assembled nucleic acid nanoparticles for targeted in vivo siRNA delivery=== | |||
http://www.nature.com/nnano/journal/v7/n6/abs/nnano.2012.73.html#close <br> | |||
[http://nanobionano.unibo.it/media/LeeTetrahedraSiRNAdeliveryCells12.pdf link title] | |||
*siRNA(small interfering RNAs) | |||
:이중가닥의 RNA(double-stranded RNA)가 Dicer에 의해 절단되어 생성되는 21에서 25nt 크기의 작은 RNA조각 | |||
:상보적인 서열을 갖는 mRNA에 특이적으로 결합하여 단백질 발현을 억제 | |||
: siRNA 가 mRNA와 100% 상보적인 경우는 mRNA 를 분해하고, 약 80-90% 상보적인 경우는 번역을 억제 | |||
*self-assembly of the DNA tetrahedron | |||
:cell 내로 siRNA 전달 가능 | |||
:크기를 정의할 수 있어야한다. | |||
:높이는 8nm, 모서리 길이는 10nm | |||
:리간드가 적절한 공간배향에 있을 때 gene silencing이 이뤄진다. | |||
[[Image:150210pjh tetrahedron.PNG]] | |||
*전달 효율 | |||
:siRNA의 circulation time (t1/2 ≈ 6 min), ONPs의 circulation time (t1/2 ≈ 24.2 min) | |||
:ONPs가 only siRNA일 때보다 세포 내로 siRNA의 전달이 더 원활하게 이뤄진다. | |||
[[Image:150210pjh ONPs.PNG]] | |||
=Team presentation= | |||
==2. 5 (Thu)== | |||
===Gel electrophoresis=== | |||
Box file name : Team3_150205_gel-eletrophoresis.pptx<br> | |||
* '''Gel electrophoresis''' | |||
#(-)charge를 띤 입자가 gel을 통해 (+)방향으로 이동 | |||
#이동속도는 입자의 전하량,크기,구조에 따라 달라짐. | |||
[[Image:150205pjh electrophoresis.png]] | |||
* '''Agarose gel electrophoresis''' | |||
#DNA,RNA를 electrophoresis 할 때 주로 사용 | |||
#핵산이 가지고 있는 전하를 이용하여 agarose gel상에서 크기,구조에 따라 분리 | |||
#electrophoresis 후 EtBr 처리하고 UV를 통해 Band 관찰 | |||
[[Image:150205pjh agarose.JPG]] | |||
* '''SDS-PAGE''' | |||
#Protein을 electrophoresis 할 때 주로 사용 | |||
#Protein은 전하, 구조가 일정치 않으므로 sds와 dtt를 처리하여 변성시킴 | |||
#Polyacrylamide gel은 disc gel로 stacking gel과 running gel로 이루어짐 | |||
#Gly와 Cl에 의해 protein이 stacking gel에서 일직선상에 정렬되고 running gel에서 size에 의한 분리가 일어남 | |||
#electrophoresis 후 Coomassie Brilliant Blue로 염색하고 Band 관찰 | |||
#Marker를 통해 size의 비교. -(agarose gel electrophoresis도 동일) | |||
#분리능을 높이기 위해 Two-dimentinal electrophoresis 또는 Western blot 하기도 함 | |||
[[Image:150205pjh sds.PNG]] | |||
=caDNAno= | =caDNAno= | ||
==1 | ==2. 1 (Sun)== | ||
[[Image: | [[Image:150201pjh-cadnano Glasses3.jpg]]<br> | ||
[[Image: | [[Image:150201pjh-cadnano Glasses1.png]]<br> | ||
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=Paper Study= | |||
==2. 1 (Sun)== | |||
===Precision Templating with DNA of a Virus-like Particle with Peptide Nanostructures=== | |||
http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja4008003#close Box file name : Ruff2013J_Am_Chem_Soc(jae hyung park).pdf<br> | |||
[http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja4008003 link title] | |||
* '''정확한 길이의 빌딩블록을 자가조립하는 것은 쉽지않다.''' | |||
:섬유형 바이러스의 모양을 모방하여 정밀하게 길이를 제어할 수 있다. | |||
* '''인공 capsomer를 만든다.''' | |||
:인공 capsomer의 양전하 부분에 주형 DNA가 결합하여 섬유형 바이러스 같은 형태를 만든다. | |||
:주형 DNA에 의해서 길이를 정밀하게 control할 수 있다. | |||
[[Image:150201pjh Virus-like.jpg]] | |||
* '''정확한 길이의 초분자의 활용''' | |||
:특정 크기의 물질을 적재하거나 더 복잡한 구조의 template, building block을 만들 수 있다. | |||
:정확한 크기의 초분자를 만들 수 있음으로서 새로운 물질을 디자인하는데 쓰일 수 있다. | |||
=caDNAno= | |||
==1. 22 (Thu)== | |||
[[Image:150122pjh_Cadnano1.jpg]]<br> | |||
[[Image:150122pjh_Cadnano1-1.png]]<br> | |||
[[Image:150122pjh_Cadnano1-3.jpg]] | |||
=Paper Study= | =Paper Study= | ||
==1. 20 (Tue)== | ==1. 20 (Tue)== | ||
===End-joining long nucleic acid polymers - STV=== | ===End-joining long nucleic acid polymers - STV=== | ||
http://nar.oxfordjournals.org/content/36/16/e104.short#close Box file name : Van_den_Hout2008Nucleic_Acids_Res(Jaehyung Park).pdf, PJH150120_stv<br> | http://nar.oxfordjournals.org/content/36/16/e104.short#close Box file name : Van_den_Hout2008Nucleic_Acids_Res(Jaehyung Park).pdf, PJH150120_stv.pptx<br> | ||
[http://nar.oxfordjournals.org/content/36/16/e104.short link title] | [http://nar.oxfordjournals.org/content/36/16/e104.short link title] | ||
* '''Ligation''' | * '''Ligation''' | ||
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* '''Biotin–streptavidin linkage''' | * '''Biotin–streptavidin linkage''' | ||
streptavidin은 단백질의 일종 biotin은 비타민의 일종으로 | streptavidin은 단백질의 일종 biotin은 비타민의 일종으로 | ||
강한 결합력으로 결합함. | 강한 결합력으로 결합함.<br> | ||
강한 결합력을 이용해 end-joining을 하는 방법. | 강한 결합력을 이용해 end-joining을 하는 방법.<br> | ||
2-step으로 이루어짐 한분자에 stv를 붙이고(1-step) | 2-step으로 이루어짐 한분자에 stv를 붙이고(1-step) <br> | ||
unbound stv를 제거한 다음 두번째 분자를 붙임(2-step) | unbound stv를 제거한 다음 두번째 분자를 붙임(2-step)<br> | ||
[[Image:150120pjh Biotin–streptavidin linkage.jpg]] | |||
* '''Gel electrophoresis''' | * '''Gel electrophoresis''' | ||
전극을 이용하여 물질을 이동시키며 | 전극을 이용하여 물질을 이동시키며 | ||
크기나 구조에 따라 이동속도의 차이가 일어남. | 크기나 구조에 따라 이동속도의 차이가 일어남.<br> | ||
크기를 분석하는 방법. | 크기를 분석하는 방법. | ||
* '''The application of Biotin–streptavidin linkage''' | * '''The application of Biotin–streptavidin linkage''' | ||
single-strand를 필요로 하는 실험에 쓰임. | single-strand를 필요로 하는 실험에 쓰임.<br> | ||
강한 결합력을 이용하여 병원성 박테리아의 선택적 포획 등에도 쓰임. | 강한 결합력을 이용하여 병원성 박테리아의 선택적 포획 등에도 쓰임.<br> | ||
=Paper Study= | =Paper Study= |
Latest revision as of 23:55, 2 March 2015
- 특수문자들
| • ∞ ♣ ♦ α β γ Δ ε η θ κ μ ν π ρ Σ τ φ ψ Ψ Ω ω
가장 앞에 있는 기호가 이미지 파일에 사용되는 구분용 특수 문자 입니다.
Paper Study
2. 24 (Tue)
Self-assembled DNA nanostructures for distance-dependent multivalent ligand–protein binding
http://www.nature.com/nnano/journal/v3/n7/abs/nnano.2008.164.html#close
link title
- Aptamer
Aptamers are oligonucleotide or peptide molecules that bind to a specific target molecule.
- Aptamer의 거리,helix 수에 따른 결합 효율
- aptamer 거리가 5.3nm일 때 최적
- four-helix bundle(4HB)가 5HB보다 결합이 높음
- Aptamer의 종류에 따른 효율
- 서로다른 Aptamer일 때가 동일한 aptamer일 때보다 효율이 높음
- Aptamer의 거리를 통한 실험결과
- Aptamer의 거리가 5.8nm,20.7nm 인 두가지로 실험을 진행했을 때 5.8nm인 부분에 Thrombin이 결합
- ※즉 선택적인 결합이 가능
Paper Study
2. 17 (Tue)
Single-molecule chemical reactions on DNA origami
http://www.nature.com/nnano/journal/v5/n3/full/nnano.2010.5.html#close
link title
- Linker A,B,C
- non-cleavable linker type A
- linker type B, which contains a disulphide moiety that can be cleaved by reduction
- Linker C can be cleaved by singlet oxygen generated with light in the presence of a singlet oxygen photosensitizer (PS)
- three functional groups
- The reaction of biotin-linked azide Az took place in the presence of the in situ generated copper(I)-THTA (tris-(1-[3-hydroxypropyl]triazolyl-4-methyl)amine) catalyst
- The reaction of the biotin NHS-ester Es was performed in a slightly alkaline buffer/DMF mixture
- The reaction of the biotin-linked alkyne Al was studied in the presence of the in situ generated copper(I)-THTA in a DMF/buffer mixture
- The three reactions can proceed successively on the immobilized DNA origami template with high selectivity.
Team presentation
2. 12 (Thu)
Nucleic acid enzymes
Box file name : 150212_Team3-nucleic acid enzymes.pptx
- PCR
- DNA,RNA의 특정영역을 대량으로 증폭하는 기술.
- -Primer가 taq polymerase에 의해 신장됨.
- Denaturation - Annealing - Elongation 의 과정을 반복하여 수행.
- -이론적으로 n사이클 시행 시 2^n개의 ds DNA 생성.
- mRNA를 cDNA로 역전사하는 reverse transcriptase를 이용하는 RT-PCR도 있음.
- Restriction Enzyme
- ds DNA의 특정 염기서열을 인식하여 그 부분이나 그 주변을 절단하는 효소.
- 바이러스 등 외부에서 온 DNA를 절단하여 배제시키는 자기방어 기능도 가짐.
- Restriction Enzyme에 의해 절단되는 모양에 따라 Blunt end,Sticky end로 나뉨
- Ligation
- DNA나 RNA의 끝을 이어주는 과정
- Restriction Enzyme과 함께 쓰이는 경우가 많음.
- Ligase에 의해 phosphodiester bond로 DNA 분자 내에서 일어나는 한가닥 파손(불연속)을 복구.
- Gene Cloning
- PCR을 통해 foreign DNA을 생성하고
- 같은 Restriction Enzyme으로 vector와 foreign DNA을 절단한 뒤
- foreign DNA을 vector에 삽입하여 Ligation시켜 결합함.
- 만들어진 recombinant DNA를 bacteria 내부로 trasformation 시키면
- cell 내에서 증식이 일어나고 셀 자체도 많은 colony를 이루게 됨.
Paper Study
2. 10 (Tue)
Molecularly self-assembled nucleic acid nanoparticles for targeted in vivo siRNA delivery
http://www.nature.com/nnano/journal/v7/n6/abs/nnano.2012.73.html#close
link title
- siRNA(small interfering RNAs)
- 이중가닥의 RNA(double-stranded RNA)가 Dicer에 의해 절단되어 생성되는 21에서 25nt 크기의 작은 RNA조각
- 상보적인 서열을 갖는 mRNA에 특이적으로 결합하여 단백질 발현을 억제
- siRNA 가 mRNA와 100% 상보적인 경우는 mRNA 를 분해하고, 약 80-90% 상보적인 경우는 번역을 억제
- self-assembly of the DNA tetrahedron
- cell 내로 siRNA 전달 가능
- 크기를 정의할 수 있어야한다.
- 높이는 8nm, 모서리 길이는 10nm
- 리간드가 적절한 공간배향에 있을 때 gene silencing이 이뤄진다.
- 전달 효율
- siRNA의 circulation time (t1/2 ≈ 6 min), ONPs의 circulation time (t1/2 ≈ 24.2 min)
- ONPs가 only siRNA일 때보다 세포 내로 siRNA의 전달이 더 원활하게 이뤄진다.
Team presentation
2. 5 (Thu)
Gel electrophoresis
Box file name : Team3_150205_gel-eletrophoresis.pptx
- Gel electrophoresis
- (-)charge를 띤 입자가 gel을 통해 (+)방향으로 이동
- 이동속도는 입자의 전하량,크기,구조에 따라 달라짐.
- Agarose gel electrophoresis
- DNA,RNA를 electrophoresis 할 때 주로 사용
- 핵산이 가지고 있는 전하를 이용하여 agarose gel상에서 크기,구조에 따라 분리
- electrophoresis 후 EtBr 처리하고 UV를 통해 Band 관찰
- SDS-PAGE
- Protein을 electrophoresis 할 때 주로 사용
- Protein은 전하, 구조가 일정치 않으므로 sds와 dtt를 처리하여 변성시킴
- Polyacrylamide gel은 disc gel로 stacking gel과 running gel로 이루어짐
- Gly와 Cl에 의해 protein이 stacking gel에서 일직선상에 정렬되고 running gel에서 size에 의한 분리가 일어남
- electrophoresis 후 Coomassie Brilliant Blue로 염색하고 Band 관찰
- Marker를 통해 size의 비교. -(agarose gel electrophoresis도 동일)
- 분리능을 높이기 위해 Two-dimentinal electrophoresis 또는 Western blot 하기도 함
caDNAno
2. 1 (Sun)
Paper Study
2. 1 (Sun)
Precision Templating with DNA of a Virus-like Particle with Peptide Nanostructures
http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja4008003#close Box file name : Ruff2013J_Am_Chem_Soc(jae hyung park).pdf
link title
- 정확한 길이의 빌딩블록을 자가조립하는 것은 쉽지않다.
- 섬유형 바이러스의 모양을 모방하여 정밀하게 길이를 제어할 수 있다.
- 인공 capsomer를 만든다.
- 인공 capsomer의 양전하 부분에 주형 DNA가 결합하여 섬유형 바이러스 같은 형태를 만든다.
- 주형 DNA에 의해서 길이를 정밀하게 control할 수 있다.
- 정확한 길이의 초분자의 활용
- 특정 크기의 물질을 적재하거나 더 복잡한 구조의 template, building block을 만들 수 있다.
- 정확한 크기의 초분자를 만들 수 있음으로서 새로운 물질을 디자인하는데 쓰일 수 있다.
caDNAno
1. 22 (Thu)
Paper Study
1. 20 (Tue)
End-joining long nucleic acid polymers - STV
http://nar.oxfordjournals.org/content/36/16/e104.short#close Box file name : Van_den_Hout2008Nucleic_Acids_Res(Jaehyung Park).pdf, PJH150120_stv.pptx
link title
- Ligation
DNA나 RNA의 끝을 이어주는 과정 single-strand, long-nucleic acid일 경우 효율이 떨어지는 단점
- Biotin–streptavidin linkage
streptavidin은 단백질의 일종 biotin은 비타민의 일종으로
강한 결합력으로 결합함.
강한 결합력을 이용해 end-joining을 하는 방법.
2-step으로 이루어짐 한분자에 stv를 붙이고(1-step)
unbound stv를 제거한 다음 두번째 분자를 붙임(2-step)
- Gel electrophoresis
전극을 이용하여 물질을 이동시키며
크기나 구조에 따라 이동속도의 차이가 일어남.
크기를 분석하는 방법.
- The application of Biotin–streptavidin linkage
single-strand를 필요로 하는 실험에 쓰임.
강한 결합력을 이용하여 병원성 박테리아의 선택적 포획 등에도 쓰임.
Paper Study
1. 3 (Sat)
Folding DNA to create nanoscale shapes and patterns - DNA origami
http://www.nature.com/nature/journal/v440/n7082/full/nature04586.html#close Box file name : Nature04586(PJH).pdf, PJH150103_dna origami.pptx
link title
- DNA Structure
- DNA is double helix structure.
- In DNA, there are four different types of nitrogenous base.
According to base pairing rules (A with T and C with G), hydrogen bonds bind the nitrogenous bases of the two separate polynucleotide strands to make double-stranded DNA.- A is for adenine
- G is for guanine
- C is for cytosine
- T is for thymine
- DNA origami
- DNA origami is the nanoscale folding of DNA to create arbitrary two- and three-dimensional shapes at the nanoscale.
- A long single strand DNA and staple DNA strand are required
- The use of a long single strand DNA in M13mp18.
- Staple DNA strand folded long single strand DNA.
- Use a computer to determine the way to create the correct staples needed to form a certain shape. And we create arbitrary two- and three-dimensional shapes at the nanoscale.
- The application of DNA origami
- DNA origami will enable making small computer.
- DNA origami be used to create nanorobots capable of finding and destroying cancer cells in the human body.
- Consideration
- DNA origami was very impressive and DNA origami technology development will continue.
So DNA origami can be adapted to create more complex or larger structures.