MOLDIAG:Syllabus
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Contents
- 1 Conteúdos programático
- 1.1 Introdução ao diagnóstico molecular em medicina
- 1.2 Biossíntese e função de macromoléculas
- 1.3 Engenharia Genética
- 1.4 Amplificação de ácidos nucleicos - PCR
- 1.5 Métodos separativos: cromatografia e electroforese
- 1.6 Fundamentos de fluorescência
- 1.7 Métodos de fluorescência em citogenética
- 1.8 Métodos de fluorescência em citologia analítica
Conteúdos programático
Introdução ao diagnóstico molecular em medicina
- Doenças monogénicas
- Doenças poligénicas
- Biologia forense
- CODIS
- STRs
- Tipagem HLA
- Tipagem Celular por FACS
- Genotipagem por PCR
- Genotipagem por Microarrays
- Farmacogenómica
- Citocromo P450
- Susceptibilidade a doenças infecciosas
- Susceptibilidade genética: SCID
- Resistência genética: HIV
- Doenças infecciosas
- Virologia
- Bacteriologia
- Resistência aos antibióticos
- Epidemiologia molecular
- Filogenética
- Fingerprinting (genotipagem)
Biossíntese e função de macromoléculas
- Estrutura do DNA e RNA
- Organização do DNA
- RNAs codificantes e não codificantes
- RNA de interferência
- Expressão genética e síntese proteica
- Transcrição
- Maquinaria de transcrição procariótica e eucariótica
- Edição do RNA
- Síntese proteica
- Modificações pós-translacionais
Engenharia Genética
- Enzimas que modificam ácidos nucleicos
- Sistemas e vectores de clonagem
- Plasmídeos
- Cosmídeos e fagmídos
- YACs, BACs
- Transformação, conjugação, transfeção e electroporação
- Sistemas de selecção de recombinantes
- Antibióticos
- Sistemas auxotróficos
- Proteínas fluorescentes
- Sistemas de produção de proteínas recombinantes
- Bibliotecas genómicas (genotecas)
- Hibridação de ácidos nucleicos
- Southern blotting
- Northern blotting
Amplificação de ácidos nucleicos - PCR
- Amplificações pela polimerase
- RFLP-PCR
- RAPD-PCR
- Multiplex PCR
- PCR Multiplex alelo específico
- PCR Longo
- PCR Competitivo
- PCR colony
- Touchdown (gradiente) e Hot Start
- PCR Degenerado
- PCR In situ
- PCR Inverso
- RACE
- Nested PCR
- RT-PCR / RT-PCR
- Methylation Spectific PCR (MS-PCR)
- PCR em tempo real
- Conceitos
- Syber-green
- Sondas
- Curvas de calibração e quantificação
- Aplicações pela ligase
- LCR
- MLPA
- Métodos especiais
- DNA ramificado (bDNA)
- Ribotipagem
Métodos separativos: cromatografia e electroforese
A.Análise de Proteínas
- Electroforese
- Tipos de matrizes
- Electroforese nativa (PAGE)
- Electroforese desnaturante (SDS-PAGE)
- Focagem isoeléctrica (IEF)
- Géis 2D
- Cromatografias
- De camada fina (TLC)
- Permuta iónica
- Afinidade / Imunoafinidade
- HPLC
- GC
B.Ácidos nucleicos
- Electroforese
- Agarose
- PFGE: Pulsed field gel electrophoresis
- Electroforese capilar (EC)
- HPLC desnaturante (DHPLC)
- EC vs DHPLC
Fundamentos de fluorescência
- Espectro electromagnético da luz visível
- Amplitude de onda
- Comprimento de onda
- Frequência
- Fluoróforos
- Estado fundamental
- Estado excitado
- Diagrama de Jablonski
- Lei de Kasha
- Lei de Planck
- Desvio de Stokes (Stokes shift)
- FRET - Förster resonance energy transfer
- Cromóforos e fluoróforos
- Quenching
- Detecção in vivo da interacção de proteínas
- Sondas moleculares
- Microscopia
- Fluoróforos usados em microscopia
- Photobleaching (decaimento)
- Métodos para minimizar o decaimento
- Filtros
- Espelhos dicróicos
- Microscopia de fluorescência
- Microscopia confocal
Métodos de fluorescência em citogenética
- Citogenética clássica vs citogenética convencional
- Hibridação in situ
- Sondas e DNA alvo
- Desnaturação
- Renaturação / hibridação
- Preparação da amostra
- Tipos de material biológico
- Fixação
- Pré-tratamento das lâminas
- Tipos de sonda
- Sequência repetitiva
- Single copy sequences
- Chromosome paiting
- Marcação das sondas
- Random primed labelling
- PCR
- Imunodectecção
- Marcação directa vs marcação indirecta
- Amplificação de sinal
- Método ABC
- Método Streptavidina-biotina
- Técnicas especiais de FISH
- SKY-FISH
- Zoo-FISH
- Fiber-FISH
- PRINS
- CGH
- PNA-FISH
- DNA microarrays / CGH microarrays
- Flow-cytometry FISH
Métodos de fluorescência em citologia analítica
- Imunoquímica
- ELISA
- Western-blotting
- Citometria de fluxo
- Tipos de citometros
- Dinâmica de fluídos
- Sondas fluorescentes
- Análise multiparamétrica
- Case studies