Biomod/2014/Sendai/temp/0821/Experiment: Difference between revisions
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<div id="main"> | <div id="main"> | ||
<h1>Experiment</h1> | <h1>Experiment</h1> | ||
<h2>リポソームに味成分を閉じ込める実験</h2> | |||
<h3>Purpose</h3> | |||
<p>DNAによりリポソームが放出されるまでにリポソームの中に味成分を閉じ込めておく必要がある。そのためリポソーム内にグルコースが閉じ込められることを確認する。本実験では閉じ込める味成分 | |||
の一例としてグルコースを上げ、リポソームの中に甘味の味成分であるグルコースを閉じ込める実験を行う。</p> | |||
<h3>Principle</h3> | |||
<p>人工細胞膜は疎水性であるため、イオン、アミノ酸やグルコースは透過できないようになっている。(ref. エッセンシャル)グルコースの濃度は糖度計を利用して測定する。 | |||
本実験ではグルコース溶液のみのサンプルAとグルコースを閉じ込めたリポソームを含むサンプルBを準備し、対照実験を行う。両者のサンプル内のグルコース総量は同じである。(溶液の全量も同じ) | |||
リポソームにグルコースが閉じ込められていればグルコースは糖度計の電極には作用しない。そのため前者は時間に関係なくグルコースの濃度が一定となり、後者は温度を上げる前はグルコース濃度は | |||
低いが、温度を上げればリポソームが割れるのでグルコースの濃度が大きくなり、最終的にサンプルAと同じ濃度になるはずである。</p> | |||
<img src="http://openwetware.org/images/c/ca/8-25experiment.png"> | |||
<h3>Method</h3> | |||
<p>?Mのグルコース溶液(サンプルA)を作製する。リポソームを界面通過法により作成し、サンプルBを作製した。サンプルAとBを糖度計の電極の上に?µlを滴下し、グルコース濃度を測定した。その後、お湯にサンプルAとサンプルBを一緒に浸からせ温度を高くした状態の両サンプルのグルコース濃度を測定した。</p> | |||
<h3>(期待される)Result</h3> | |||
<p>サンプルAは温度を上げる前も後も濃度は変化せずに一定になった。サンプルBは温度を上げる前はグルコース濃度が低く、温度を上げた後はグルコース濃度がサンプルAと同じになった。</p> | |||
<h3>Discussion</h3> | |||
<h3>Protocol</h3> | |||
Making liposome<br> | |||
<table class="table"> | |||
<tr> | |||
<td> DOPC(10nM)</td><td>27µl</td> | |||
</tr> | |||
<tr> | |||
<td> Cholesterol(10nM) </td><td>3µl | |||
</td> | |||
</tr> | |||
</table> | |||
Table1 Materials for liposome preparation<br> | |||
<h2>リポソームにコカコーラを閉じ込める実験</h2> | |||
<h3>Purpose</h3> | |||
上記の実験の妥当性をさらに検討するために、コカコーラをリポソームに閉じ込める実験を行った。 | |||
<h3>Principle</h3> | |||
リポソームの中にコカコーラが閉じ込められれば、光学顕微鏡で観察した際にリポソームの中がコーラの色になるはずである。(←色素が閉じ込められているだけでは?) | |||
<h3>Method</h3> | |||
界面通過法によりリポソームを作製する際にインナーバッファーをコカコーラを使用してリポソームを作製し、光学顕微鏡で観察した。 | |||
<h3>(期待される)Result</h3> | |||
リポソームの中にコーラの色を確認できた。 | |||
<h3>Discussion</h3> | |||
<h3>Protocol</h3> | |||
<h2>制限酵素の機能確認とバッファーの適性を評価する実験</h2> | |||
<h3>Purpose</h3> | |||
DNA回路の実現には制限酵素が正しく機能する必要がある。本実験では制限酵素の機能確認実験を行う。また、酵素の機能はバッファーの条件に依存する。ポリメラーゼとニッカーゼを使ったオシレーターの論文ではNBEバッファーを使用している。(ref.)我々のDNA回路はこの論文に従い、NBEバッファーを使用する。そのため、NBEバッファー中で正しく機能する制限酵素を選ぶ必要がある。本実験では制限酵素の候補として????を上げ、NBEバッファー中での機能確認を行った。 | |||
<h3>Principle</h3> | |||
本実験では以下の配列のDNAを使用した。認識配列の制限酵素の認識配列以外の配列は同じであり、左側の配列は20bp、右側の配列は10bpである。制限酵素が作用すれば左側の20bp程度の配列と右側の10bp程度の長さのDNAに切れる。DNAのみのサンプルとDNAと制限酵素を加えたサンプルを各制限酵素について準備し、アクリルアミドゲル電気泳動を行う。また、「切れる前のDNAのバンド」と「切れてできたDNAのバンド」の蛍光強度を比較することにより、酵素の活性度合を評価する。 | |||
<h3>Method</h3> | |||
NEBバッファー中のDNAを用意し、DNAのみのサンプルとDNAと制限酵素を加えたサンプルを準備し?%アクリルアミドゲルで電気泳動を行った。各バンドの蛍光強度を測定した。 | |||
<h3>(期待される)Result</h3> | |||
制限酵素を入れた方は切れる前のDNAと切れた後の2つのDNAのバンドが確認できた。 | |||
蛍光強度から?が最も制限酵素の活性の度合いが高かった。 | |||
<h3>Discussion</h3> | |||
<h3>Protocol</h3> | |||
CCGGTGGACTTAATGCGACATCTAGAAATGGTTAGC | |||
GCTAACCATTTCTAGATGTCGCATTAAGTCCACCGG | |||
CCGGTGGACTTAATGCGACAGGATCCAATGGTTAGC | |||
GCTAACCATTGGATCCTGTCGCATTAAGTCCACCGG | |||
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GCTAACCATTGAATTCTGTCGCATTAAGTCCACCGG | |||
CCGGTGGACTTAATGCGACACCATGGAATGGTTAGC | |||
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GCTAACCATTGTAGACTGTCGCATTAAGTCCACCGG | |||
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GCTAACCATTGTTAACTGTCGCATTAAGTCCACCGG | |||
CCGGTGGACTTAATGCGACACCTGAGGAATGGTTAGC | |||
GCTAACCATTCCTCAGGTGTCGCATTAAGTCCACCGG | |||
Fitness value is -22.445723871822707 | |||
<h2>シーソーゲートの確認実験</h2> | |||
<h3>Purpose</h3> | |||
<h3>Principle</h3> | |||
<h3>Method</h3> | |||
<h3>Result</h3> | |||
<h3>Discussion</h3> | |||
<h3>Protocol</h3> | |||
ドメイン 配列 | |||
xuavy CATGCCTTACTCTTGAGAGCGAATTGTGTCGTCTT | |||
AUXT GCTCTCAAGAGTAAGGCATGATAGG | |||
txu CCTATCATGCCTTACTCTTG | |||
vyaxu GAATTGTGTCGTCTTAGAGCCATGCCTTACTCTTG | |||
AYVA GCTCTAAGACGACACAATTCGCTCT | |||
vya GAATTGTGTCGTCTTAGAGC | |||
px TGGCACCTGTCTACCCATGCCTTACTCTT | |||
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<h3>Purpose</h3> | |||
<h3>Principle</h3> | |||
<h3>Method</h3> | |||
<h3>Result</h3> | |||
<h3>Discussion</h3> | |||
<h3>Protocol</h3> | |||
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Latest revision as of 08:30, 27 August 2014
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<h2>リポソームに味成分を閉じ込める実験</h2> <h3>Purpose</h3> <p>DNAによりリポソームが放出されるまでにリポソームの中に味成分を閉じ込めておく必要がある。そのためリポソーム内にグルコースが閉じ込められることを確認する。本実験では閉じ込める味成分 の一例としてグルコースを上げ、リポソームの中に甘味の味成分であるグルコースを閉じ込める実験を行う。</p>
<h3>Principle</h3> <p>人工細胞膜は疎水性であるため、イオン、アミノ酸やグルコースは透過できないようになっている。(ref. エッセンシャル)グルコースの濃度は糖度計を利用して測定する。 本実験ではグルコース溶液のみのサンプルAとグルコースを閉じ込めたリポソームを含むサンプルBを準備し、対照実験を行う。両者のサンプル内のグルコース総量は同じである。(溶液の全量も同じ) リポソームにグルコースが閉じ込められていればグルコースは糖度計の電極には作用しない。そのため前者は時間に関係なくグルコースの濃度が一定となり、後者は温度を上げる前はグルコース濃度は 低いが、温度を上げればリポソームが割れるのでグルコースの濃度が大きくなり、最終的にサンプルAと同じ濃度になるはずである。</p>
<img src="http://openwetware.org/images/c/ca/8-25experiment.png">
<h3>Method</h3> <p>?Mのグルコース溶液(サンプルA)を作製する。リポソームを界面通過法により作成し、サンプルBを作製した。サンプルAとBを糖度計の電極の上に?µlを滴下し、グルコース濃度を測定した。その後、お湯にサンプルAとサンプルBを一緒に浸からせ温度を高くした状態の両サンプルのグルコース濃度を測定した。</p>
<h3>(期待される)Result</h3> <p>サンプルAは温度を上げる前も後も濃度は変化せずに一定になった。サンプルBは温度を上げる前はグルコース濃度が低く、温度を上げた後はグルコース濃度がサンプルAと同じになった。</p>
<h3>Discussion</h3>
<h3>Protocol</h3> Making liposome<br>
<table class="table"> <tr> <td> DOPC(10nM)</td><td>27µl</td> </tr> <tr> <td> Cholesterol(10nM) </td><td>3µl </td> </tr> </table> Table1 Materials for liposome preparation<br>
<h2>リポソームにコカコーラを閉じ込める実験</h2> <h3>Purpose</h3> 上記の実験の妥当性をさらに検討するために、コカコーラをリポソームに閉じ込める実験を行った。
<h3>Principle</h3> リポソームの中にコカコーラが閉じ込められれば、光学顕微鏡で観察した際にリポソームの中がコーラの色になるはずである。(←色素が閉じ込められているだけでは?)
<h3>Method</h3> 界面通過法によりリポソームを作製する際にインナーバッファーをコカコーラを使用してリポソームを作製し、光学顕微鏡で観察した。
<h3>(期待される)Result</h3> リポソームの中にコーラの色を確認できた。
<h3>Discussion</h3> <h3>Protocol</h3>
<h2>制限酵素の機能確認とバッファーの適性を評価する実験</h2> <h3>Purpose</h3> DNA回路の実現には制限酵素が正しく機能する必要がある。本実験では制限酵素の機能確認実験を行う。また、酵素の機能はバッファーの条件に依存する。ポリメラーゼとニッカーゼを使ったオシレーターの論文ではNBEバッファーを使用している。(ref.)我々のDNA回路はこの論文に従い、NBEバッファーを使用する。そのため、NBEバッファー中で正しく機能する制限酵素を選ぶ必要がある。本実験では制限酵素の候補として????を上げ、NBEバッファー中での機能確認を行った。
<h3>Principle</h3> 本実験では以下の配列のDNAを使用した。認識配列の制限酵素の認識配列以外の配列は同じであり、左側の配列は20bp、右側の配列は10bpである。制限酵素が作用すれば左側の20bp程度の配列と右側の10bp程度の長さのDNAに切れる。DNAのみのサンプルとDNAと制限酵素を加えたサンプルを各制限酵素について準備し、アクリルアミドゲル電気泳動を行う。また、「切れる前のDNAのバンド」と「切れてできたDNAのバンド」の蛍光強度を比較することにより、酵素の活性度合を評価する。
<h3>Method</h3> NEBバッファー中のDNAを用意し、DNAのみのサンプルとDNAと制限酵素を加えたサンプルを準備し?%アクリルアミドゲルで電気泳動を行った。各バンドの蛍光強度を測定した。
<h3>(期待される)Result</h3> 制限酵素を入れた方は切れる前のDNAと切れた後の2つのDNAのバンドが確認できた。 蛍光強度から?が最も制限酵素の活性の度合いが高かった。
<h3>Discussion</h3> <h3>Protocol</h3> CCGGTGGACTTAATGCGACATCTAGAAATGGTTAGC GCTAACCATTTCTAGATGTCGCATTAAGTCCACCGG
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CCGGTGGACTTAATGCGACAAAGCTTAATGGTTAGC GCTAACCATTAAGCTTTGTCGCATTAAGTCCACCGG
CCGGTGGACTTAATGCGACAGAATTCAATGGTTAGC GCTAACCATTGAATTCTGTCGCATTAAGTCCACCGG
CCGGTGGACTTAATGCGACACCATGGAATGGTTAGC GCTAACCATTCCATGGTGTCGCATTAAGTCCACCGG
CCGGTGGACTTAATGCGACAGCCGGCAATGGTTAGC GCTAACCATTGCCGGCTGTCGCATTAAGTCCACCGG
CCGGTGGACTTAATGCGACAGTAGACAATGGTTAGC GCTAACCATTGTCTACTGTCGCATTAAGTCCACCGG
CCGGTGGACTTAATGCGACAGTCTACAATGGTTAGC GCTAACCATTGTAGACTGTCGCATTAAGTCCACCGG
CCGGTGGACTTAATGCGACAAGATCTAATGGTTAGC GCTAACCATTAGATCTTGTCGCATTAAGTCCACCGG
CCGGTGGACTTAATGCGACAGTTAACAATGGTTAGC GCTAACCATTGTTAACTGTCGCATTAAGTCCACCGG
CCGGTGGACTTAATGCGACACCTGAGGAATGGTTAGC GCTAACCATTCCTCAGGTGTCGCATTAAGTCCACCGG
Fitness value is -22.445723871822707
<h2>シーソーゲートの確認実験</h2> <h3>Purpose</h3> <h3>Principle</h3> <h3>Method</h3> <h3>Result</h3> <h3>Discussion</h3> <h3>Protocol</h3> ドメイン 配列 xuavy CATGCCTTACTCTTGAGAGCGAATTGTGTCGTCTT AUXT GCTCTCAAGAGTAAGGCATGATAGG txu CCTATCATGCCTTACTCTTG vyaxu GAATTGTGTCGTCTTAGAGCCATGCCTTACTCTTG AYVA GCTCTAAGACGACACAATTCGCTCT vya GAATTGTGTCGTCTTAGAGC px TGGCACCTGTCTACCCATGCCTTACTCTT VAUX CGCTCTCAAGAGTAAGGCATG
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