WangLab:PCR Programs

Program 5 (single mutation for quickchange, 5-6kbp, Pfu polymerase, for PCDNA3 or PCDNA3’)

 * 1) stage 1, step 1, 95oC, 30 sec, cycle 1
 * 2) stage 2, for 16 cycles.
 * 3) * step 1, 95oC, 30 sec
 * 4) * step 2, 55oC, 1 min
 * 5) * step 3, 68oC, 18 min

Program 4 (single mutation for quickchange, 5-6kbp, Pfu polymerase, for PRSETb)

 * 1) stage 1, step 1, 95oC, 30 sec, cycle 1
 * 2) stage 2, for 18 cycles.
 * 3) * step 1, 95oC, 30 sec
 * 4) * step 2, 55oC, 1 min
 * 5) * step 3, 68oC, 12 min

Program 32 (PCR SH2 domain, 5-6kbp)

 * 1) stage 1, for 2 cycles, hold temperature.
 * 2) * step 1, 95oC, 2 min,
 * 3) * step 2, 40oC, 2 min
 * 4) * step 3, 72oC, 2 min 30 sec
 * 5) stage 2, for 28 cycles
 * 6) * step 1, 95oC, 1 min
 * 7) * step 2, 52oC, 1 min
 * 8) * step 3, 72oC, 2 min 30 sec
 * 9) stage 3, step 1, 72oC, 10 min

Program 10 (PCR for difficult annealing primers)

 * 1) stage 1, step 1, 95oC, 5 min
 * 2) stage 2, cycles 2.
 * 3) * step 1, 95oC, 1 min
 * 4) * step 2, 40oC, 1 min
 * 5) * step 3, 72oC, 2 min 30 sec
 * 6) stage 3, cycles 5
 * 7) * step 1, 95oC, 1 min
 * 8) * step 2, 43oC, 1 min
 * 9) * step 3, 72oC, 2 min 30 sec
 * 10) stage 4, cycles 5
 * 11) * step 1, 95oC, 1 min
 * 12) * step 2, 45oC, 1 min
 * 13) * step 3, 72oC, 2 min 30 sec
 * 14) stage 5, cycles 20
 * 15) * step 1, 95oC, 1 min
 * 16) * step 2, 52oC, 1 min
 * 17) * step 3, 72oC, 2 min 30 sec
 * 18) stage 6, step 1, 72oC, 10 min, cycle 1