User:Gaston Paris:Notebook/Vectores pK19mobSacB

= Idea General = Clonar en pK19mobSacB los fragmentos flanqueantes de los siguiente genes:
 * LOV-HK de Brucella
 * BAB1_1671 de Brucella

Clonar en el vector pSac las regiones flanqueantes de los siguientes genes: En este caso se clonaran con los genes de resistencia Km y Spectinomicina.
 * RR2 de Rhizobium
 * RR5 de Rhizobium

Chequeo
Δ1671 esta Ok. Los oligos corresponden a lo esperado. Se espera un fragmento de 325 pb para la región 5' y 329 pb para la región 3'.

PCR para amplificar fragmentos (20/11/09)
A cada tubo se agregaron 5 μL de primer FWD y 5 μL de primer REV, 39 μL de MIX y 1 μL de Pfu FIL. Se largo en PCR IVEMA (Lab302) con los siguientes ciclos:
 * 5' a 94°C
 * Seguido de 35 ciclos de:
 * 30" a 93°C
 * 1' a 55°C
 * 1' a 68°C
 * 10' a 72°C de extensión final

Los tubos se rotularon:
 * 1671 5' con los oligos 1671_5_FWD_Eco y 1671_5_REV
 * 1671 3' con los oligos 1671_3_FWD y 1671_3_REV_Eco
 * BaLOV 5' con los oligos BaLOVHK_5_FWD_Bam y BaLOVHK_5_REV
 * BaLOV 3' con los oligos BaLOVHK_3_FWD y BaLOVHK_3_REV_Bam