User:Margarida Azevedo/Notebook/Margarida Azevedo/2010/05/04

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"Vectores"

Os vectores de DNA permitem a replicação, transporte e/ou expressão de segmentos de DNA de interesse para células alvo. Os vectores mais frequentemente utilizados são vectores plasmídicos, moléculas de DNA circulares derivadas de sequências de DNA bacteriano extra-cromossómico e modificadas para incluir elementos genéticos de interesse.

1. Quais as características básicas que um vector plasmídico deve ter? Vector permite transportar cópias de DNA.

- Origem de replicação

- Sítios de clivagem de enzimas de restrição (multiple cloning site, local de policlonagem)

- gene de resistência a um fármaco para poder haver selecção das células do hospedeiro

2. Os vectores podem ser representados pela sua sequência de DNA ou por mapas que incluem a indicação dos elementos mais relevantes presentes no vector.

Pesquise no google imagens dos vectores pUC, pGEX, pcDNA, pEGFP e o sistema pTre/pTet-On. Que diferentes características apresentam estes vectores e para que servem?

pUC - vector procariótico pGEX - proteína fica ligada ao GST, forma-se proteína de fusão.PROCARIÓTICO pcDNA - resistência à neomicina (vai ser selecionado), vai permitir produzir rnamensageiro em células eucarióticas. EUCARIÓTICO. permite fazer clonagem em bactérias, purificá-lo e dps continuá-lo em células eucarióticas. pEGFP - proteína fluorescente verde. Podemos estudar células vivas e estudar proteínas de interesse.

3. De que forma é que um vector plasmídico é mantido na célula alvo? á custa do antibiótico (selecção).

4. Para além de vectores de DNA simples como os plasmídeos, podem-se construir vectores mais complexos com base em vírus, facilitando a entrada das sequências desejadas nas células alvo. Entre estes, os vectores retrovirais são muito utilizados por permitirem a integração estável do DNA no genoma da célula alvo. Se tivesse que construir um destes vectores, como faria para garantir que não há perigo de infecção e doença?


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