User:Margarida Azevedo/Notebook/Margarida Azevedo/2010/04/20

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 * Proponha com detalhe adequado um procedimento experimental que permita a identificação das mutações presentes no gene da beta-globina na família do nosso caso de estudo.

O procedimento experimental adequado seria o PCR.

Material/Reagentes: - Mix: H2O, solução tampão,dNTP's, primers, DNA polimerase - 10 x solução tampão (contém MgCl2) - mix de dNTPs - Foward and reverse Primer - DNA - DNA polimerase - H2O

Síntese do primer à mão: - O primer deve ter um comprimento de 15 a 30 nucleótidos. Identificamos a no gene as duas mutações da Maria e escolhemos 20 nucleótidos a 5' e 20 nucleótidos a 3' para a síntese dos primers. A 5' o primer (primer reverso) terá a mesma sequência de nucleótidos que a cadeia 3' - 5'. A 3', o primer será complementar à cadeia 3' - 5'. Temos ainda que desenhar primers internos, que cubram a região central da sequência.

Síntese do primer utiçizando ferramentas informáticas: podemos usar NCBI

Procedimento experimental:

Proponha com detalhe adequado um procedimento experimental que permita o estudo da expressão do gene da beta-globina na família do nosso caso de estudo.


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