User:Iolanda S. O. Santos/Notebook/Caderno de Apontamentos/2010/05/04

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Exercício TP7
Vectores

Os vectores de DNA permitem a replicação, transporte e/ou expressão de segmentos de DNA de interesse para células alvo. Os vectores mais frequentemente utilizados são vectores plasmídicos, moléculas de DNA circulares derivadas de sequências de DNA bacteriano extra-cromossómico e modificadas para incluir elementos genéticos de interesse.

1. Quais as características básicas que um vector plasmídico deve ter?

- origem de replicação

- sítios de clivagem de enzimas de restrição (multiple cloning site)

- gene de resistência a 1 farmaco para poder haver selecção das cell do hospedeiro

2. Os vectores podem ser representados pela sua sequência de DNA ou por mapas que incluem a indicação dos elementos mais relevantes presentes no vector. Pesquise no google imagens dos vectores pUC, pGEX, pcDNA, pEGFP e o sistema pTre/pTet-On. Que diferentes características apresentam estes vectores e para que servem?

3. De que forma é que um vector plasmídico é mantido na célula alvo?

4. Para além de vectores de DNA simples como os plasmídeos, podem-se construir vectores mais complexos com base em vírus, facilitando a entrada das sequências desejadas nas células alvo. Entre estes, os vectores retrovirais são muito utilizados por permitirem a integração estável do DNA no genoma da célula alvo. Se tivesse que construir um destes vectores, como faria para garantir que não há perigo de infecção e doença?

retrovirus: retirar "gag" k codifica proteínas estruturais e o "pol" k codifica a transcriptase reversa e deixar o "env" k codifica glicoproteína do envelope

adenovírus associados – substituir genes "rep" (codifica para fc replicativa e de integração) e "cap" (codifica componentes estruturais)

(Expressar Apo k provoca hipermutaçao?)


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